Skip to content

Схема постановки пцр

Скачать схема постановки пцр PDF

Через несколько лет после опубликования этой идеи, в г. Mullis получил за нее Нобелевскую премию. В начале использования метода после каждого цикла нагревания- охлаждения приходилось добавлять в реакционную смесь ДНК-полимеразу, так как она быстро инактивировалась при высокой температуре.

Процедура была очень неэффективной, требовала много времени и фермента. В г. Эти ферменты способны выдерживать множество циклов реакции, что позволяет автоматизировать проведение ПЦР.

Суть метода. Полимеразная цепная реакция позволяет получить амплификаты длиной до нескольких тысяч пар нуклеотидов. Для увеличения длины ПЦР-продукта до тыс. Для ПЦР в режиме реального времени выпускают приборы, оборудованные флуоресцентным детектором. Существуют также приборы с автоматической крышкой и отделением для микропланшет, что позволяет встраивать их в автоматизированные системы. Обычно при проведении ПЦР выполняется циклов, каждый из которых состоит из трех стадий: денатурации, отжига праймеров, элонгации рис.

На рис. График изменения температуры в пробирке в течение одного цикла полимеразной цепной реакции.

Сущность ПЦР как метода молекулярной биологии заключается в многократном избирательном копировании определённого гена участка ДНК при помощи специальных ферментов в условиях in vitro. Репликация ДНК in vivo также может считаться амплификацией. Итак, ПЦР - это многократное копирование определенных фрагментов ДНК in vitro в процессе повторяющихся температурных циклов.

Как же протекает процесс реакции в пределах одного температурного цикла? Образование нуклеотидной цепи осуществляется ферментом ДНК-полимеразой. Однако для начала работы ферменту необходима стартовая площадка.

fb2, fb2, rtf, PDF